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https://rinacional.tecnm.mx/jspui/handle/TecNM/2507| Title: | CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE CUTINASAS |
| Authors: | Vázquez Alcántara, Laura del Carmen |
| metadata.dc.subject.other: | CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE CUTINASAS |
| Issue Date: | 2018-03-05 |
| Publisher: | Tecnológico Nacional de México |
| metadata.dc.publisher.tecnm: | Instituto Tecnológico de Veracruz |
| Description: | Las cutinasas (EC. 3.1.1.74) son enzimas que llevan a cabo la hidrólisis del polímero lipídico llamado cutina, el cual es un componente estructural de las plantas. Estas enzimas son clasificadas como hidrolasas de ésteres de ácidos carboxílicos (Carvalho et al., 1998). Son enzimas producidas por bacterias como Bacillus subtilis, Citrobacter, Enterobacter levaduras como Candida tropicalis) y hongos fitopatógenos como Aspergillus, Fusarium, Trichoderma, Moniliophtora (Basurto et al., 2010; Panizo et al., 2005; Akira Yoshimi et al., 2016). Cada microorganismo presenta en su genoma diferentes genes de cutinasas. Fusarium solani presenta 2 genes de cutinasas, Monilia fructicola tiene 4 genes de cutinasas), Penicillum citrinum contiene un gen y M. roreri presenta tres cutinasas putativas en su genoma (Lin y kolattukudy 1980; Lee et al., 2010; Liebminger et al., 2007). También se ha encontrado que Aspergillus nidulans presenta 4 cutinasas en el genoma, sin embargo sólo se ha visto la expresión de 2 cutinasas; ANCUT1 la cual presenta actividad de esterasa y ANCUT2 que presenta actividad de esterasa y cutinasa (Castro-Ochoa et al., 2012). M. roreri es un hongo fitopatógeno el cual ataca al cultivo de cacao provocando la enfermedad de moniliasis, este microorganismo cuenta con dos formas de ataque, por medio de esporas, al llegar al fruto para contaminarlo (biotrófica) y cuando se encuentra dentro del fruto secreta varias enzimas y toxinas, las cuales se degradan el tejido y causan la necrosis del fruto (hemibiotrófica). Recientemente se ha reportado al parecer la expresión de una esterasa en un medio con cutícula de cacao como inductor. Es importante mencionar que en su genoma, M. roreri contiene tres cutinasas. (Torres-Palacios C. et al., 2016). Las cutinasas tienen diferentes aplicaciones en la industria de alimentos entre las más importantes están la industria de aceites, grasas y de agentes saborizantes y aromatizantes. Además, se han usado en otras industrias como en la de detergentes y peletería. También se ha visto que pueden ser útiles para la degradación de compuestos contaminantes como PET y pesticidas (Castro et al., 2010). Debido a lo anterior, se ha optado por expresar estas enzimas en hospederos heterólogos los cual ayudará a obtener una mayor cantidad de enzima en condiciones más controladas. El sistema de expresión de las proteínas recombinantes depende de las propiedades de la proteína para poder seleccionar un hospedero adecuado. Uno de los sistemas eucariontes más utilizados es P. pastoris, una levadura unicelular de crecimiento rápido y cultivo fácil. P. pastoris tiene ventajas sobre otros hospederos ya que puede procesar y plegar las proteínas adecuadamente, además los costos de producción son menores comparados con otros sistemas de expresión. Esta levadura es metilotrófica, es decir es capaz de metabolizar metanol como única fuente de carbono, P. pastoris oxida el metanol a formaldehído y genera peróxido de hidrógeno. La enzima alcohol oxidasa muestra una baja afinidad por el oxígeno y genera grandes cantidades de enzima. Esta levadura presenta dos genes de alcohol oxidasa AOX1 y AOX2 (Cereghino y Cregg, 2000). Otro sistema, ampliamente utilizado es la bacteria Escherichia coli, del cual existen varios vectores que por ejemplo permiten expresar la enzima recombinante en el periplasma utilizando IPTG como inductor. Dadas las aplicaciones e importancia de las cutinasas el propósito general del presente trabajo es expresar en un sistema heterólogo y caracterizar la cutinasa recombinante del hongo fitopatógeno M. roreri. |
| metadata.dc.type: | info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Appears in Collections: | POSGRADO |
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