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https://rinacional.tecnm.mx/jspui/handle/TecNM/1590Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | Rudiño Piñera, Enrique | - |
| dc.contributor.author | Espinosa Luna, Graciela | - |
| dc.creator | Espinosa Luna, Graciela | - |
| dc.date.accessioned | 2021-07-23T22:47:54Z | - |
| dc.date.available | 2021-07-23T22:47:54Z | - |
| dc.date.issued | 2018-06-28 | - |
| dc.identifier.uri | https://rinacional.tecnm.mx/jspui/handle/TecNM/1590 | - |
| dc.description | Geobacillus es un género de bacterias termófilas que está ampliamente distribuido en el planeta, posee lipasas y carboxilesterasas cuya importancia como herramienta biotecnológica radica en su capacidad de reaccionar en forma quimio, regio y estereo selectiva, en presencia de solventes orgánicos. CaesCCR11 es una carboxilesterasa producida por el microorganismo termófilo Geobacillus thermoleovorans CCR11, cuya clonación y posterior caracterización indicó que presentó actividad a 50 °C y se incrementó cuando se incubó a pH 9.0 y a 60 °C, por 20 min. Del análisis in silico de la estructura primaria se encuentra que tiene 250 residuos y más de la mitad son hidrofóbicos, tiene pI de 5.31 y 27.3 kDa, es monomérica y pertenece a la familia XV de carboxilesterasas (Espinosa, 2013). El objetivo general de este trabajo de investigación fue profundizar en el conocimiento bioquímico y estructural de la esterasa (CaesCCR11) producida por Geobacillus thermoleovorans CCR11. Primeramente la enzima se purificó por medio de electroforesis preparativa, se concentró por evaporación centrífuga y después de dializarla se estabilizó con ASB14 y NaCl. La proteína purificada y soluble se colocó en más de 1300 pozos de cristalización con soluciones de kits comerciales. Se encontraron cinco condiciones con cristales de proteína de las que se eligió una, misma que se mejoró y con la que se obtuvieron microcristales y un monocristal. Los microcristales fueron observados en un microscopio electrónico de transmisión JEM 2010F. No fue posible determinar la estructura de la proteína, por lo que es imprescindible mejorar el traslado, la colocación de los cristales en la rejilla y la crioinmersión. Por otro lado, el monocristal fue llevado a difractar por rayos X, el resultado obtenido fue que no hubo patrón de difracción debido a un desorden presente en el cristal. El análisis de la proteína en solución por RMN, confirmó el desorden presente también en la proteína soluble. De manera alternativa fue posible predecir la estructura terciaria de CaesCCR11 utilizando el programa Raptor-X. El resultado fue que CaesCCR11 posee seis hélices-α y siete hojas-β del plegamiento canónico α/β hidrolasa, un dominio de tapa de 44 residuos, un agujero oxianión (Phe 29 y Met 98), la triada catalítica (Ser97, Asp196 e His226) y ocho puentes de sal. Además, en la caracterización molecular se encontró que el gen que codifica para CaesCCR11 (caesccr11) forma parte de un operón junto con una proteína de membrana no identificada (duf). Presumiblemente la expresión del operón se induce en condiciones de estrés para la célula, lo que pudiera sugerir una nueva función de las esterasas intracelulares. | es_MX |
| dc.language.iso | spa | es_MX |
| dc.publisher | Tecnológico Nacional de México | es_MX |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0 | es_MX |
| dc.subject | info:eu-repo/classification/cti/6 | es_MX |
| dc.subject.other | Cristalización, esterasa,Geobacillus thermoleovorans CCR11 | es_MX |
| dc.title | Cristalización de la esterasa de Geobacillus thermoleovorans CCR11 y determinación de su estructura terciaria | es_MX |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | es_MX |
| dc.contributor.director | Oliart Ros, Rosa María | - |
| dc.rights.access | info:eu-repo/semantics/openAccess | es_MX |
| dc.publisher.tecnm | Instituto Tecnológico de Veracruz | es_MX |
| Appears in Collections: | POSGRADO | |
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| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| 2018 Espinosa Luna Graciela.pdf | Cristalización de la esterasa de Geobacillus thermoleovorans CCR11 | 15.96 MB | Adobe PDF | View/Open |
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