1. Repositorio Institucional del Tecnológico Nacional de México (RI - TecNM)
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Title:	APROXIMACIÓN METAGENÓMICA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ENZIMAS LIPOLÍTICAS PROVENIENTES DE LA ZONA GEOTÉRMICA “LOS HUMEROS”
Authors:	Mora González, Paola Carolina
metadata.dc.subject.other:	ENZIMAS LIPOLÍTICAS, LOS HUMEROS
Issue Date:	2019-12-01
Publisher:	Tecnológico Nacional de México
metadata.dc.publisher.tecnm:	Instituto Tecnológico de Veracruz
Description:	El interés en el estudio de la diversidad de comunidades microbianas presentes en los ecosistemas ha cobrado auge en los últimos años. Debido a las limitaciones asociadas a la determinación de la diversidad de comunidades microbiana por su heterogeneidad, se han implementado técnicas independientes de cultivo como el uso de la metagenómica ya que permite analizar la estructura y función de un gran número de genes presentes en un ambiente determinado, sin necesidad de aislar y/o cultivar los microorganismos. En los últimos años, la metagenómica se ha convertido en una de las herramientas más sofisticadas para la identificación de nuevos genes, vías metabólicas y metabolitos secundarios a través de la construcción y escrutinio de bibliotecas metagenómicas, resultando útil para la identificación de la composición filogenética y funcional de comunidades microbianas en diversos ecosistemas mediante la secuenciación directa y análisis del DNA ambiental. El objetivo del presente trabajo fue describir la diversidad bacteriana y determinar la presencia de enzimas lipolíticas en la zona geotérmica “Los Humeros” para lo cual el proyecto se dividió en dos etapas: la primera mediante técnicas dependientes de cultivo y la segunda, independientes de cultivo. Se aislaron un total de 29 cepas del sustrato de una alberca de condensación, de las cuales 10 mostraron actividad lipolítica, pertenecientes a la especie Geobacillus stearothermophilus y Bacillus licheniformis. Las enzimas lipolíticas producidas por seis cepas (intracelular y extracelular) tuvieron un PM entre 26 y 27 kDa, y mostraron propiedades biotecnológicamente atractivas, como actividad en un rango amplio de temperatura, termoestabilidad y resistencia al pH, y a la presencia de detergentes y solventes orgánicos. A partir de la secuenciación masiva del DNA de la muestra enriquecida se identificaron un total de 9 phyla, siendo los predominantes Firmicutes y Proteobacteria. De los 51,262 ORFs, 920 genes corresponden a enzimas hidrolíticas pertenecientes a 35 familias, de las cuales 31 son Fosfolipasas, 26 Carboxilesterasas, y 18 Lipasas. 152 secuencias no fueron asignadas a ninguna actividad lipolítica específica. El enriquecimiento en medio de cultivo con aceite favoreció la presencia de los phyla Firmicutes, Proteobacteria y Actinobacteria, así como la dominancia de géneros productores de enzimas lipolíticas como Geobacillus y Bacillus. En el caso de las muestras de DNAm analizadas por 16s RNAr se encontró un total de 17 phyla (15 cm, 80 ºC) y 18 phyla (50 cm, 90 ºC), siendo nuevamente el phylum predominante Firmicutes, seguido de los phyla Chloroflexi, Proteobacteria, Actinobacteria, Acidobacteria. La abundancia relativa de los taxones se vio afectada por la profundidad y la temperatura, siendo los hipértermofilos de los grupos más abundantes en las muestras de suelo a 50 cm de profundidad. A partir de los resultados obtenidos se pudo concluir que a nivel phylum la diversidad presente en la zona geotérmica “Los Humeros” es consistente con lo reportado en otros puntos del Cinturón Volcánico Transmexicano (Michoacán y Chiapas). Los phyla Firmicutes, Chloroflexi, Proteobacteria y Actinobacteria son los más abundantes. La abundancia relativa en general a todos los niveles taxonómicos se vio afectada por la temperatura, siendo los hipértermofilos de los grupos más abundantes en la muestra a 90°C (50 cm), asi como el hallazgo de secuencias sin identificar sugiere una riqueza enzimática y filogenética de la zona geotérmica “Los Humeros”. Este gran número de fragmentos no clasificados podrían ser un indicio de la presencia de nuevos organismos con potencial biotecnológico en esta zona.
metadata.dc.type:	info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
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