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Titre:	CLONACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA FOSFOLIPASA DE Brevibacillus thermoruber HT42 AISLADO DE LA ZONA GEOTERMAL LOS HUMEROS
Auteur(s):	LARA SÁNCHEZ, JONATHAN
metadata.dc.subject.other:	CLONACIÓN, CARACTERIZACIÓN, FOSFOLIPASA, Brevibacillus thermoruber HT42
Date de publication:	2020-06-17
Editeur:	Tecnológico Nacional de México
metadata.dc.publisher.tecnm:	Instituto Tecnológico de Veracruz
Description:	El estudio de los microorganismos extremófilos ha contribuido a avances tecnológicos e industriales debido a que estos organismos y sus enzimas pueden soportar las condiciones drásticas que a menudo prevalecen en el ámbito industrial y biotecnológico. Actualmente, se ha estudiado una gran variedad de enzimas producidas por extremófilos con diversas de aplicaciones, lo que ha estimulado la búsqueda de nuevas extremoenzimas con propiedades específicas. Las enzimas que hidrolizan a los fosfolípidos, llamadas fosfolipasas, han sido aplicadas con éxito en la industria de panadería, biosíntesis y modificación de lípidos, refinación de aceites comestibles y en productos farmacéuticos, sin embargo, son pocos los reportes de fosfolipasas de extremófilos. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue la clonación y caracterización de una fosfolipasa de Brevibacillus thermoruber HT42 para su aplicación biotecnológica. Se analizaron in silico dos secuencias de aminoácidos (PLA-HT y PLC- HT) que codifican para posibles fosfolipasas, y se encontró que PLC-HT está relacionada con una proteína de transporte en la membrana y no presenta sitio activo, por lo cual fue descartada. Se seleccionó una posible fosfolipasa A2 (PLA-BT) en la que se identificó el canal oxianión y un sitio activo formado por una diada catalítica (Ser38-Asp183), característico de fosfolipasas citolíticas. Esta enzima fue clonada y expresada en E. coli BL21 DE3pLysS, con una actividad de 332.7 μKat, y se encontró que la proteína recombinante PLA-BT es una enzima termófila (60 oC)-alcalófila (pH 8) con peso molecular de 35.5 kDa, que posiblemente forma dímeros, y con preferencia por sustratos de cadena media, empleando como sustratos p-NF-ésteres.
metadata.dc.type:	info:eu-repo/semantics/masterThesis
Collection(s) :	POSGRADO

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